蜂蜜多酚提取物對大鼠急性酒精性肝損傷的保護作用 ！
2021-03-11
酒精性肝損傷（ALD）是由于過量攝入酒精引起的，對全球肝病發(fā)病率和死亡率有重大影響，已成為世界關(guān)注的主要健康問題之一。一次性過量飲酒容易引起急性ALD，進而發(fā)展為脂肪肝、肝纖維化以及肝硬化。目前，我國預防和治療急性ALD大多采用藥物進行干預，但長期使用藥物會對身體產(chǎn)生較大的毒副作用，越來越受到人們的排斥。因此，尋找具有護肝功效的天然來源化合物已成為國內(nèi)學者的研究熱點之一。
蜂蜜，又名石蜜，是蜜蜂將采集得到的花蜜與自身分泌物結(jié)合后制成的天然物質(zhì)。研究表明，蜂蜜中含有180多種物質(zhì)，包括糖、多酚、維生素、礦物質(zhì)、氨基酸等，具有解酒、抗氧化、抑菌以及抗癌等功效。因此，蜂蜜被廣泛應用于食品和藥品領(lǐng)域。多酚作為蜂蜜中的主要活性成分之一，已有文獻報道其不僅能清除自由基，還能抑制促炎基因的表達，具有很強的體外抗氧化和抗炎特性。Pan等證實天然物質(zhì)的抗氧化和抗炎功效可改善酒精引起的肝臟損傷。
貴州大學釀酒與食品工程學院研究了蜂蜜多酚提取物對大鼠急性酒精性肝損傷的保護作用。方法：大鼠被隨機分為空白對照組、模型組、藥物對照組（100 mg/（kg m b ·d））以及蜂蜜多酚提取物低、高劑量組（100、200 mg/（kg m b ·d）），連續(xù)灌胃30 d后，除空白對照組外，其余各組給予體積分數(shù)56%的白酒（15 mL/kg m b ）建立急性肝損傷模型。12 h后測定血清轉(zhuǎn)氨酶活力、肝臟抗氧化和抗炎指標；實時熒光定量聚合酶鏈式反應法檢測細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、c-Jun N端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）及p38激酶（p38 kinase，p38）mRNA表達量；蘇木精-伊紅染色觀察肝組織病理學變化。結(jié)果：與模型組相比，各劑量組均能降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、丙二醛、腫瘤壞死因子-α水平，提高肝臟超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、谷胱甘肽過氧化物酶活力及還原型谷胱甘肽水平，下調(diào)ERK、JNK、p38 mRNA表達量，并改善肝臟病理學變化情況。
結(jié)論：蜂蜜多酚提取物對大鼠急性酒精性肝損傷具有明顯的保護作用，其機制可能與其抗氧化和抗炎活性有關(guān)。
實驗采用體積分數(shù)56%白酒一次性灌胃建立大鼠急性ALD模型，通過測定血清生化指標和觀察肝組織病理學變化研究蜂蜜多酚提取物對肝損傷的保護作用。ALT和AST是存在于肝細胞內(nèi)的酶，當肝臟受到酒精損害時，肝細胞被破壞，ALT和AST就會分散到血液中 。因此，血清ALT和AST的活性常作為判斷肝損傷的指標 。肝臟組織病理學觀察是評價肝臟損傷程度的金標準，在各類動物肝損傷模型中廣泛應用 。
實驗結(jié)果顯示，與空白對照組相比，模型組大鼠血清ALT和AST活力顯著升高，肝細胞結(jié)構(gòu)損傷，胞漿脂質(zhì)過度積累，表明急性酒精攝入引起大鼠肝細胞發(fā)生脂肪變性，肝細胞膜通透性增加，提示ALD模型建立成功；相比于模型組，補充不同劑量的蜂蜜多酚提取物能顯著降低大鼠ALT和AST活力，有效改善肝組織病變情況，表明蜂蜜多酚提取物對急性ALD具有一定的保護作用。研究表明氧化應激是導致ALD的主要機制之一 。
酒精在肝臟中代謝會產(chǎn)生ROS并消耗抗氧化劑，破壞機體氧化-抗氧化平衡，從而產(chǎn)生氧化應激，促進ALD的發(fā)生 。GSH作為體內(nèi)重要的抗氧化劑，可以清除大量自由基，對肝臟抗氧化系統(tǒng)具有重要意義 。除GSH外，抗氧化物酶如SOD、GSH-Px和CAT在肝臟抗氧化系統(tǒng)中也起著重要作用。SOD通過催化超氧陰離子轉(zhuǎn)化為氧和過氧化氫來清除ROS 。GSH-Px可以在GSH存在下減少脂肪酸氫過氧化物和過氧化氫 。
CAT可催化過氧化氫分解為水和氧 。這些抗氧化劑均能保護肝臟免受氧化應激的損害，但很容易被脂質(zhì)過氧化物清除 。MDA是脂質(zhì)過氧化的最終產(chǎn)物，肝臟中MDA水平升高可干擾抗氧化防御并引起肝細胞損傷，使血液中ALT和AST活力升高 。實驗結(jié)果表明，酒精攝入會造成肝臟抗氧化劑水平降低，脂質(zhì)過氧化物含量升高，引起肝細胞發(fā)生氧化損傷，進一步提示本實驗建模成功，這與Mir 和Kim 等的實驗結(jié)論一致。
給藥蜂蜜多酚提取物后，肝臟中SOD、GSH-Px、CAT和GSH水平較模型組均升高，MDA含量顯著降低，表明蜂蜜多酚具有抗氧化活性，可通過抑制氧化應激改善酒精對肝臟造成的損傷。除氧化應激外，炎癥反應也是引起ALD的重要原因 。酒精攝入會損傷腸道黏膜，導致腸道內(nèi)大量有毒物質(zhì)進入肝臟后激活MAPK信號通路，誘導細胞活化并釋放炎癥因子，引起肝臟炎癥 。TNF-α是機體內(nèi)主要的炎癥因子，它的過量產(chǎn)生能夠刺激肝臟發(fā)生炎癥反應，進而導致ALD 。有研究顯示，巨噬細胞是產(chǎn)生TNF-α最主要的細胞，而MAPK通路影響著巨噬細胞的激活 。
MAPK信號通路是近年來新發(fā)現(xiàn)的介導胞內(nèi)信號傳導和防治ALD的重要通路，主要調(diào)節(jié)細胞的增殖、分化、凋亡、壞死等多種生理病理過程 。MAPK家族主要包括細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（extracellular signal-regulatedkinase，ERK），c-Jun N端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）和p38激酶（p38 kinase，p38），它們均能調(diào)節(jié)巨噬細胞活化并產(chǎn)生TNF-α，促進肝臟炎癥的發(fā)生 。Wang Xiaodong等 研究發(fā)現(xiàn)，在酒精干預期間，抑制MAPK途徑可以降低TNF-α活性，有效保護ALD。
研究結(jié)果顯示，酒精處理顯著上調(diào)ERK、JNK和p38 mRNA的表達量，并增加TNF-α水平，促使肝臟發(fā)生炎癥反應；而給予不同劑量的蜂蜜多酚提取物可不同程度地下調(diào)ERK、p38和JNK mRNA的表達，并明顯減少肝臟TNF-α的含量，說明蜂蜜多酚提取物可通過抑制MAPK通路而降低TNF-α的水平，從而緩解肝臟炎癥反應。這些發(fā)現(xiàn)表明蜂蜜多酚具有很強的抗炎活性，可通過抑制肝臟發(fā)炎從而降低酒精對肝造成的損傷。
綜上所述，一次過量攝入酒精會導致大鼠肝臟受損，而補充蜂蜜多酚提取物能明顯降低大鼠血清ALT和AST活力，改善肝組織病變情況，通過提高肝臟中SOD、GSH-Px、CAT活力和GSH水平并降低MDA含量緩解酒精所致氧化應激損傷，并通過抑制MAPK信號通路的激活降低TNF-α水平調(diào)節(jié)炎癥反應，最終改善酒精誘導的急性ALD。因此，蜂蜜多酚提取物可以作為功能保健食品在急性ALD的治療中具有重要的意義。
（來源：《蜂蜜多酚提取物對大鼠急性酒精性肝損傷的保護作用》來源于《食品科學》2020年41卷21期154-159頁，作者：黃穎，譚書明，陳萍，陳小敏，宋長軍）
